真菌是生物界的重要類群之一，在農業、工業微生物研究中占據重要的地位。真菌DNA/RNA的提取為病原真菌起源、遺傳多樣性、致病性等科學研究提供了很大的便利。為確保實驗的效果、獲得質量更高的DNA/RNA提取，需要對樣本做好預處理，本文慧慶小編為大家總結一下真菌DNA/RNA提取時樣本的預處理方法。
  

  真菌DNA/RNA提取時樣本的預處理方法總結

  

  1. 關注不同類型樣本差異

  
  由于不同類型的樣本往往具有差異性較大的組成和形態，所以在取樣量和處理方式上是有很大不同的。舉例來講，酵母菌菌體小，取樣量應該比其他菌菇類樣本取樣量適當減少；草菇菌體疏松、易研磨，應快速研磨并選擇研磨效果較輕的塑料研磨工具；金針菇、海鮮菇等比較難研磨的樣本則需要選擇金屬研磨工具。
  

  2. 選擇合適的取樣部位

  

  以四種食用菌為樣本，分別取菌蓋、菌褶相等質量提取核酸，電泳結果見下圖：

  

  由圖可見，取樣部位選擇菌褶，提取核酸條帶的亮度和條帶數量明顯增多。所以結合不同樣本的具體情況，選擇合適的取樣部位，能夠獲得質量更高的DNA/RNA。
  

  3. 注意樣本不同生長期的差異

  
  樣本萌芽期：個體生長迅速、細胞分裂快，核酸復制和表達均旺盛，基因組核酸和小片段核酸含量均豐富。營養代謝幾乎可以忽略，主要是細胞生長分裂所須的消耗，因此雜質干擾相對較少。這個時期的樣本較易提取獲得相對完整、質量和產量更高的核酸。
  
  快速生長期：相較萌芽期的個體營養代謝較為旺盛，因此提取核酸的雜質干擾稍多。偶爾會出現獲得基因組條帶較少，小片段核酸較多的情況。
  
  生殖成熟期：細胞開始向不同的放方向分化，因此RNA含量較多，較易獲得RNA。
  
  營養積累期：菌菇個體的生長基本停滯，細胞分裂不旺盛，基因表達也較低，可能會呈現基因組DNA穩定，RNA較少的情形。同時次生代謝產物較多，營養代謝也旺盛，因此雜質干擾嚴重，所以提取核酸可能含有較多雜質。
  

  4.考慮樣本所處環境的影響

  
  低溫脅迫、干旱脅迫、高溫高濕等特殊環境的影響：
  
  低溫脅迫：南京農業大學馮志勇等將25℃培養35d的香菇菌絲放在10℃的環境中進行低溫處理0-24H，然后提取核酸對ESTs基因進行擴增，結果見下表：
  從上表數據可見，低溫脅迫6H或更長時間，ESTs基因至少有60%沉默表達，但隨著低溫脅迫時間延長，又逐漸恢復表達。
  
  
  反復凍融：反復凍融會造成細胞死亡和破裂，釋放出核酸及細胞內的各種酶，造成核酸的降解。所以樣本要避免反復凍融，特別是需要提取完整基因組核酸，或需要提取比較脆弱易降解的RNA時。
  
  以上就是小編關于真菌DNA/RNA提取時樣本的預處理方法總結，希望對您有所幫助。慧慶生物專業從事核酸提取試劑、生物磁珠等的研發、生產、銷售業務，積累了豐富的技術和經驗，如果您有疑問及經驗建議分享，或者有相關采購需求等，歡迎您留言或者電話聯系我們。